10000×Sybr Green II核酸染料
   

SYBR Green II主要用于RNA和单链DNA电泳。是EB和替代品，无致癌性，超敏感性。用作常规电泳时，须将商品化的核酸MARKER作一定倍数的稀释（1/5-1/10），这样才能得到比较理想结果。

产品特点：

● 无毒性：属花箐类染料，容易生物降解，无致癌毒性。

● 灵敏度高：至少可检出20pg ssDNA或RNA，高于EB染色法25～100倍。

● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

● 操作简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。

● 适用范围广：可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯 酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等;可用于 ssDNA 或 RNA 染色。

● 使用方便：对分子生物学中常用的酶(如：Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。

● 经济：价格比银染便宜。

使用方法：

1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)

　　(1) 熔胶后，冷却胶至50℃左右，加入Sybr Green II 核酸染料。每100mL胶中加入3～5μL Sybr Green II 10,000× 储液，以此比例类推。

　　(2) 按照常规方法进行电泳。

　　注意事项：

　　(1) 此方法染色可以准确确定核酸片段分子量，染料用量相对较少。1mL染料大约可以做300块 100mL的胶。

　　(2) 由于Sybr Green II热稳定性较差，不能在热的胶溶液中直接添加，需要等待溶液冷却至50℃左右才能添加。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。

　　2.泡染法

　　(1) 按照常规方法进行电泳。

　　(2) 用pH 7.0～8.5 的缓冲液(如：TAE，TBE 或 TE)，按照10000﹕1的比例稀释Sybr Green II 10,000× 储液，混匀，制成1× 染色液。

　　(3) 将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的1× 染色液浸没凝胶。用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10～30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的1× 染色液轻轻地倒在胶板上，让其均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。

　　注：用泡染法染色时，可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量较多。

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