细胞周期检测试剂盒(流式)的操作,关键在于细致与精确。在前述步骤中,我们已经成功收集了细胞并进行了固定与透化处理。接下来,我们将进入标记DNA的关键阶段。
根据试剂盒说明书,用适量的PBS缓冲液轻轻洗涤处理过的细胞,以去除残留的固定剂和透化剂。此步骤需小心操作,避免细胞损失。洗涤后,离心去除上清液,留下细胞沉淀。
加入DNA染色剂(如PI或7-AAD),确保染色剂充分覆盖细胞。在避光条件下,轻轻混匀细胞悬液,并在室温下孵育一段时间,让染色剂充分渗入细胞内与DNA结合。孵育时间根据说明书指示进行,过长或过短都可能影响染色效果。
孵育结束后,再次离心去除多余的染色剂。用适量的PBS缓冲液重悬细胞,调整细胞浓度至适合流式细胞仪检测的范围。此时,细胞悬液应呈现均匀的染色状态,无明显的细胞团块或聚集现象。
将处理好的细胞悬液转移至流式细胞管中,准备进行流式细胞仪检测。设置流式细胞仪的参数,如激光功率、荧光通道灵敏度等,以确保准确检测DNA含量。通过流式细胞仪分析细胞周期分布,可以得到G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比,为后续的细胞生物学研究提供重要信息。