兔免疫球蛋白G2(IgG2)ELISA实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中兔免疫球蛋白G2(IgG2)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白G2(IgG2)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻-底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G2(IgG2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔免疫球蛋白G2(IgG2)浓度。

在操作过程中，为了确保实验结果的准确性和可靠性，还需注意几个关键步骤的质量控制。首先，样本的采集与处理需严格遵循操作规程，避免污染和变性，确保样本中IgG2的真实含量得以保留。其次，加样时需精确控制体积，使用高质量的移液器，减少操作误差。此外，温育时间和温度也需精确控制，以保证抗原-抗体反应的充分进行，同时避免非特异性结合的产生。

洗涤步骤同样至关重要，它能有效去除未结合的抗体和杂质，减少背景噪音，提高信噪比。在加入底物TMB显色时，应迅速且均匀，避免长时间暴露于空气中，以减少氧化干扰。

最终，在读取OD值时，酶标仪的校准和波长选择需准确无误，以保证数据的准确性和可比性。通过这一系列精细的操作，结合先进的数据处理软件，可绘制出精确的标准曲线，从而准确计算出样本中兔免疫球蛋白G2(IgG2)的浓度，为科研和临床诊断提供有力的数据支持。

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