ELISA试剂盒的温育常选用的温度有4℃、室温、37℃、43℃等。其中37℃是试验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。一般来说两次抗原抗体反应通常在37℃约1～2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多数反应在冰箱中过夜，以形成最多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。

操作技巧

1) 加样器应笔直参加标本，防止刮擦包被板底部，加样进程中防止液体外溅，血清残留在反应孔壁上；同时应注意避免气泡产生。

2) 加样器吸头要清洗干净，防止污染，加样次序要与说明书同步，否则可能会导致结果出错，试验重复性差。

3) 在进行试验前应对试验的各项参数有充分的了解，如环境温度、反应孵育温度和孵育时间、洗刷的次数等，ELISA试剂盒是否符合要求。

4) 显色液量不宜过多，加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色体系后要避光反应；显色液量不能过多，防止显色过强。

5) 要确保加液量相同，使用滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量，会造成显色不一致，从而造成差异。

水浴保温办法

1、保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般采用水浴，可将ELISA微孔板置于水浴箱中，ELISA微孔板底应贴着水面，使温度迅速平衡。

2、为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，可让微孔板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA微孔板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最后将ELISA板放在湿纱布上。

3、湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低时更应如此。

4、操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。

5、室温温育时，只要平置于操作台上即可。

6、无论是水浴还是湿盒温育，微孔板均不宜叠放，以确保各板的温度都能迅速平衡。

7、应注意温育的温度和时间应按规定执行。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。