搜索一下“细胞离心”,关注度比较高的几个就是细胞离心的转速和时间或者和转速时间相关的问题,那我们就重点介绍一下细胞离心机转速和时间相关的问题。
细胞离心的转速和时间为什么这么重要?
细胞本身非常脆弱,离心过程中就需要小心翼翼,速度快了,细胞会变形或者破裂,含辛茹苦培养的细胞就不能用了,哭唧唧~~
细胞离心的速度和时间推荐:
不同类型细胞离心,它们适合的条件也不同。
传代细胞离心收集:
离心条件:80g-300 x g,常温或者 37°C,时间 3-5 min
检测用细胞离心:
离心条件:100g-300 x g,常温或者 4°C,时间 3-10 min
特殊细胞离心收集:
PBMC分离条件,400 x g,4°C,20 min
推荐有了,但是不同类型细胞,离心的参数也大不相同。比如今天小师弟说,做植物的花粉小孢子细胞离心时,paper上推荐使用450g,4min,但是经过多试实验中他只用了160g,4min,就可以把细胞完全离心下来了,就算如此,对细胞还是有很大的损伤。
所以在自己不熟悉的仪器前面还是要小心谨慎些的,建议多做几次预实验,做梯度离心,注意每次都要镜检上清,以确认没有细胞损失。
选择什么样的离心机合适?
离心转速不能高;---低速离心机
不同的细胞对温度的敏感性不同;---需要选择是否要带温度调节功能
转子启动运行后,升降速过程可能造成细胞的机械损伤;---需要升降速可调
活细胞的离心速度一定要低,优选水平离心,收集更充分。---需要能配水平转子
离心的试管一般是15ml和50ml;---需要能同时离心15和50ml转子