小鼠骨来源树突状细胞(BMDC)的培养：

1.取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！(6W-8W，以前用只年把的养出来外形也张牙舞爪，但流式检测没有CD11c表达，很奇怪啊；性别方面公母不限，经典版本说公的好，公的壮实，骨头大)

2.冲骨髓细胞，我冲出来的骨髓细胞永远没有文献上说的那样多，但不影响大局，我一次用两只，怕出意外少了细胞，论坛里有战友说不要混一起，我不知道具体原因，盼赐教

3. 细胞计数，不去红细胞！(不知是好是坏，文献说去红细胞会把一些祖细胞也去掉了)记数，计数只记白细胞(形态学区分，红细胞无核较小，目前我的眼睛目前还在为此积累经验)，2×10e6(似乎太低，这套方案作者是架起式一皿养到第12天的，所以我个人觉得看你在哪天收细胞做下游实验，如果只养到第6天或者第8天，多点应该也行吧？)白细胞种100mm细菌培养皿(注意是细菌培养皿，说悬浮细胞还是用细菌皿好，还说抑制细胞贴壁，让更多祖细胞向树突细胞分化而不是巨噬细胞)，这一天记为第0天

4.第3天加等体积(10ml)BMDC培养基

配方：每50ml含：1640基础培养基45ml， 5ml灭活胎牛血清，50ul 100×的beta巯基乙醇(一直不知道它的作用，请高手跳出来作答谢谢啊)，500ul 100×的谷氨酸盐(谷氨酰胺？我现在用Gibco的Glutamax，说不会降解产生氨)，1ug rmGM-CSF(Chemicon和PPT的都用过，现在用PPT，还行好像)

5.第6天，第8天半量换液，离心设置为300g，5min(不知道够不够，肯定有损失)

6.第10天300g，5min收集悬浮细胞转到细胞培养皿(巨噬细胞多贴点壁)，同时培养基成分里rmGM-CSF含量至少减半(好像说怕继续分化成非树突吧，文献看了有一段时间记得不那么清楚了惭愧啊，其实文献仅供参考，也不一定对，关键还是自己的实践)

7.第11天加LPS刺激其成熟，普遍认为(也可能是我自己认为)，第6天或第8天收不成熟DC会比较多，看实验需要，建议想要不成熟DC的朋友请在这两天收网)